В данной работе поставлена цель - изучить влияние длительного воздействия гиперкалиевого (60мМ KCl) раствора Кребса (ГРК) на тоническую активность ЦП с учетом функционального состояния эндотелия. Исследовали две группы полосок. Группа 1 представлена ЦП из сосуда, взятого в опыт через 1 час после забоя животного и при интактном эндотелии. Группа 2 представлена ЦП из сосуда, хранившегося при 4оС в течение 20-24 часов от момента забоя, и у которых удаляли эндотелий механически при помощи миниатюрного ватного тампона. Регистрацию тонической активности 55 ЦП проводили по методике [3] на «Миоцитографе» при 37оС и их перфузии раствором Кребса или ГРК (60мМ KCl) со скоростью 0,7 мл/мин. В дополнительной серии из 9 опытов (5 полосок группы 1 и 6 - группы 2) к ГРК добавлялись блокаторы адренорецепторов - ницерголин (10-7 г/мл) и обзидан (10-6 г/мл) с целью исключить возможное влияние на процессы сокращения эндогенных катехоламинов. Этими растворами полоски перфузировали 60 минут, анализируя изменение тонуса полоски каждые 10 минут и выражая его в процентах к первому этапу наблюдения (табл.1.). В работе использовали параметрический метод статистики (M±m), различия между результатами оценивали по критерию Стьюдента, считая их достоверными при p<0,05.
Установлено, что в условиях перфузии раствором Кребса все полоски обладали низким базальным тонусом. Замена раствора Кребса на ГРК вызывала подъем тонуса. Во времени он претерпевал определенные изменения, характер которых в группах 1 и 2 был различным (табл.1). В группе 1 в первые 10 минут полоски развивали тонус, величина которого была в 1,8 раза меньше, чем в группе 2 (9,2 против 16,7 мН). В последующем в группе 1 тонус полосок возрастал и к 60-й минуте достигал 257,7% от 1-го этапа. В группе 2 тонус полосок был относительно постоянным. Индивидуальный анализ показал, что в группе 1 число полосок, тонус которых прогрессивно снижался, было намного меньше, чем в группе 2 (4,3% против 28,2%, р<0,05). Показано, что добавление в ГРК адреноблокаторов не влияло на характер изменения тонуса полосок в условиях воздействия ГРК.
Представленные данные позволяют предполагать, что при интактном эндотелии развитие тонуса полосками в условиях воздействия ГРК частично тормозится NO, выделяемого эндотелием. В процессе длительного воздействия ГРК на эндотелий продукция NO тормозится (или истощается в виду отсутствия L-аргинина), что и приводит к росту тонуса. На полосках группы 2, т.е. с поврежденным эндотелием, уже в первые 10 минут воздействия ГРК вызывает максимальное сокращение. С другой стороны, результаты исследования показывают, что в условиях in vitro синтез NO можно ингибировать длительным воздействием гиперкалиевого раствора. Такая экспериментальная модель может быть использована для оценки влияния вещества на синтез NO.
Таблица 1. Величина тонуса циркулярных полосок почечной артерии при 60-минтуной перфузии ГРК (в мН и в % к величине тонуса на 1-м этапе)
|
Этапы |
Длительность воздействия, мин |
Группа 1 |
Группа 2 |
||||
|
n |
мН |
% к 1 этапу |
n |
мН |
% к 1 этапу |
||
|
1 |
10 |
23 |
9,2±1,6 |
100 |
32 |
16,7±1,5* |
100 |
|
2 |
20 |
23 |
10,5±1,8 |
124,3±9,61 |
32 |
18,7±1,7* |
112,6±3,91 |
|
3 |
30 |
23 |
11,9±1,8 |
145,3±14,51 |
32 |
17,4±2,1* |
107,0±9,7* |
|
4 |
40 |
23 |
13,2±1,7 |
166,0±17,01,2 |
32 |
18,1±2,4* |
99,8±8,6* |
|
5 |
50 |
23 |
16,6±1,91,2 |
217,7±25,11,2,3 |
32 |
18,2±2,7* |
90,8±12,7* |
|
6 |
60 |
23 |
19,2±2,01,2,3,4 |
257,7±31,11,2, 3,4 |
32 |
21,0±2,8* |
111,6±15,0* |
1,2,3,4,5,6 - различия достоверны по сравнению с 1, 2, 3, 4, 5, 6 этапом, * - различия с группой 1 достоверны, p<0,05
Таблица 2. Распределение ЦП в зависимости от характера изменения тонуса при 60-минутном воздействии гиперкалиевого раствора
|
Изменение тонуса |
Группа 1 |
Группа 2 |
||
|
Абс. число |
% |
Абс. число |
% |
|
|
Рост |
16 |
69,6±9,6 |
13 |
40,6±8,7* |
|
Падение |
1 |
4,3±4,2 |
9 |
28,2±8,0* |
|
Волнообразное колебание |
6 |
26,1±9,2 |
10 |
31,2±8,2 |
* - различие с группой 1 достоверно, р<0,05
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:
- Кашин Р.Ю. и др.//Успехи совр. ест. 2006, №8, с.70.
- Кашин Р.Ю. и др.//Успехи совр. ест. 2006 №11, с.48.
- Циркин В.И и др.//Доклады РАН. 1996. 351(4), с.565-566.