Степень биодеградации при биологической очистке достигает в жидкой питательной среде 38-52%, а в твердой питательной среде - 74,5-80% в зависимости от активности углеводородокисляющих микроорганизмов [1]. Микроорганизмы выделяют из природных микробных ассоциаций, способных к деградации природных субстратов.
Среди углеводородокисляющих микроорганизмов особенно активно ведут деструкцию следующие рода бактерий: Pseudomonas, Acinetobacter, Arthrobacter, Rhodococcus, Micobacterium; грибы: Cabdida, Fusarium, и др.
Используя накопленный литературный опыт, нами было проведено выделение микроорганизмов из загрязненной почвы и сточной воды, образующейся в производстве ацетилена и этилена на ОАО "Пласткард". Химический состав сточной воды приведен в таблице 1.
Таблица 1. Химический состав исследуемой сточной воды
|
Наименование компонентов |
Содержание, масс.% |
|
Вода |
45,00 |
|
Нафталин, α-нафталин, β-метилнафталин |
10,80 |
|
Бензол, толуол, этилбензол, ксилол |
2,35 |
|
Флуорен, диметил- и триметилфенантрен |
10,35 |
|
Поликонденсированные ароматические |
31,5 |
Данные, представленные в таблице 1, свидетельствуют, что в сточной воде ОАО "Пласткард" на органическую составляющую приходится 55,0% масс. Для выделения микроорганизмов использовали почву, загрязненную данным видом отходов.
Селективную среду, использованную для выделения микроорганизмов, в качестве единственного источника углерода вносили сточную воду в количестве 10 г/л (концентрация углеводородов 1,0% масс.). Среду стерилизовали автоклавированием при 1,0 атмосфере. Для культивирования использовали среду, в которую вносили следующие компоненты минерального питания (г/л): NH4C1 - 2.5; СаС12 • 6Н2О - 0.01; МnС12 • 4Н2O - 0.02; MgS04 • 7Н2O - 0.2; FeSO4 • 7Н2O - 0.01; NaCI - 5.0; Na2HPO4 - 10.0; КН2РО4 - 1.0; дистиллированная вода - 1л [2].
В жидкую питательную среду, описанную выше, высевали почву (1г) и сточную воду (5 мл). Кроме того, источником выделения микроорганизмов являлась почвенная вытяжка, приготовленная из навески почвы (1г), взвешенной в 5 мл 0,89 % раствора NaCl. Инкубацию посевов проводили в термостате 24 часа при 37 0С. После этого жидкие питательные среды оставляли при комнатной температуре (18-20 0C) в течение 8 суток для накопления биомассы микроскопических грибов. По окончании времени выращивания проводили высев на плотную питательную среду в чашки Петри с целью получения изолированных колоний выросших штаммов микроорганизмов. Колонии отсевали на скошенный агар. После 24 часовой инкубации из накопительных сред был выделен лишь один бактериальный штамм. Через 8 суток после высева обнаружен грибной рост.
Через 19 суток после высева в жидкую питательную среду был сделан новый посев накопительной культуры на плотную питательную среду, которую термостатировали в течение 24 часов при 37 0С. Количество выделенных штаммов увеличилось. В данный момент коллекция выделенных культур насчитывает 25 неидентифицированных штаммов, из которых 4 по культуральным и морфологическим свойствам можно отнести к микроскопическим грибам.
После выделения всех штаммов на селективной питательной синтетической среде планируется характеристика их деструктивной активности по отношению к отходам ОАО "Пласткард". Затем будет определена наиболее эффективная их комбинация для утилизации отходов.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
- Хабибулина Ф.М., Шубаков А.А., Арчегова И.Б., Романов Г.Г.Исследование способности нефтеокисляющих бактерий утилизировать нефти (углеводороды)//Биотехнология.-2002.-№6, С.57-62.
- Кобзев Е.Н., Петрикевич С.Б., Шкидченко А.Н. Исследование устойчивости ассоциации микроорганизмов- нефтедеструкторов в открытой системе//Прикладная биохимия и микробиология.-2001. -Т.37, №5, С.542-548.