Scientific journal
Modern high technologies
ISSN 1812-7320
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,940

Personal portfolio

Существует большое количество различных минеральных сорбентов на основе кремния [1 ]. Для колоночной хроматографии часто используют такие минеральные сорбенты как окись алюминия. Это мелкодисперсный порошок, обладающий большим гидродинамическим сопротивлением, с чем связанно проведение процесса при повышенном давлении (порядка 100 атмосфер). Это затрудняет создание технологического процесса производства целевого продукта. Нами была предпринята попытка использовать в качестве хроматографического носителя различные кремнеземы, такие как силикогель L, силикогель КСК, силохром С-80, силохром СХ-2,5. Наилучшей разрешающей способностью обладает силохром С-80.

Хроматографическую очистку проводили с помощью колонок диаметром 2 см, и объёмом сорбента 100 мл на различных биологических жидкостях, как на нативном растворе, так и на растворах полученных в результате анализа содержания копропорфирина III в культуральной жидкости тальковым методом. Во всех случаях нами было обнаружено, что кроме основного продукта эти жидкости содержат как минимум 3 балластных компонента. Основное количество балластных компонентов выходит из колонки перед зоной копропорфирина III . Были построены выходные кривые. В зависимости от применяемой биологической жидкости площадь балластных компонентов на выходной кривой составляет от 10 до 20 % от общей площади.

Ранее была предложена формула для количественного определения содержания копропорфирина III в биологических жидкостях [2], заключающаяся в следующем:

X=((2*D401-(D430+D380))*VЭЛ*P)/(E*1,835*YКЖ) (1)

где:

- D430,D380,D401 -оптическая плотность раствора полученного при разбавлении водно-ацетонового элюата в100-200 раз при длинах волн 430, 380 и 401 нм соответственно;

- VЭЛ- объём водно-ацетонового элюата, мл;

- VКЖ-обьём культуральной жидкости в которой происходила сорбция копропорфирина III тальком;

- Р- разведение водно-ацетонового элюата перед определением оптической плотности;

- * Е=0,667 , удельный показатель поглощения 1,835-поправочный коэффициент.

По методике описанной выше (хроматографическое разделение) было проведено масштабирование процесса хроматографической очистки препарата, как из нативного раствора, так и из водно-ацетонового элюата полученных после анализа тальковым методом, что дало возможность выделить балластные компоненты и очищенный копропорфирин III, в достаточных для проведения анализа количествах. Были сняты спектры поглощения балластных компонентов и копропорфирина III при длинах волн от 300 до 700 нм с интервалом 2 нм. Оказалось что длины волн при максимумах поглощения балластных веществ и копропорфирина III практически совпадают. При этом оптические плотности этих веществ при длинах волн 380 и 430 нм значительно меньше оптической плотности максимумов поглощения.

 Поэтому вычитание оптических плотностей: D401-(D430+D380) в формуле (1) не обоснованно так как максимумы поглощения копропорфирина III и балластных веществ совпадают. Это завышает содержание копропорфирина III в культуральной жидкости на 10-20 %. Таким образом, имеется следующее предложение. В наиболее ответственных операциях (например, при составлении балансовых операций), для получения наиболее объективных результатов необходимо использовать хроматографическую очистку биологических жидкостей на кремнезёмах, выделив при этом фракцию копропорфирина III. Затем провести анализ содержания копропорфирина III в выделенной фракции по той же методике, используя формулу (1), но вместо объёма водно-ацетонового элюата подставить в неё объём фракции копропорфирина III.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

  1. В.М. Коликов, Б.В. Мчедлишвили.- Хроматография биополимеров на макропористых кремнеземах- Ленинград: Наука, 1986, сc. 3 - 15
  2. J.E. Falk. Porphyrins and metalloporphyrins.-Amsterdam, London, New York, Elsevier publ. comp., 1964. pp. 169, 171, 172, 263.