Основная технологическая схема состояла из следующих этапов:
- получение сиропа калины - базовой части сиропа;
- введение в него морского кальция.
Основные технологические особенности этих этапов заключались в создании стабильной гетерогенной системы-суспензии, подбор и введение в неё консервантов и стабилизаторов, а также биологическое обоснование состава с помощью скрининговых исследований на Paramecium caudatum, выращенной на среде Л.К. Лозина - Лозинского из особей, выделенных из естественных мест обитания.
Исследования проводили способом микроскопии, путём визуальных наблюдений с помощью микроскопа "Биолам" с увеличением 10х50.
Изменение функциональных и морфологических признаков у парамеций под действием клеточных ядов в остром опыте, наблюдаемое под микроскопом, приведены на рис. 4. Фотографии выполнены с помощью микроскопа "Биолам" с фотообъективом при увеличении 10х50х и видеопринтера СР-100 (Mitsubishi, Japan).
У туфелек, в отличие от других простейших, в каждой клетке присутствуют два ядра: микронуклеус, участвующий в половом размножении и макронуклеус, управляющий обменом веществ и ростом клетки. Таким образом, туфельке свойственно два типа размножения: бесполый путём деления клетки на две равные части и половой - посредством слияния микронуклеусов 2-х инфузорий. При делении образуются крупные одинаковые клетки (150-290 мкм). Темп размножения делением составляет 2-3 генерации в сутки. Время тестирования составляет 3-7 суток. В качестве контроля служат интактные клетки инфузорий, выдержанные в среде Л.К. Лозина-Лозинского. Условия содержания парамеций - одинаковые. Количество особей в одной капле (0,05 мл) - 5-8, температура - 20-26°С, рН растворов - 6,2-7,2 [30].
В процессе наблюдения за культурой клеток фиксировали число особей в одной капле и средний (преобладающий) размер клеток. Для подсчёта числа инфузорий использовали гемоцитометрический способ (камера Горяева). Различие в концентрации живых парамеций в опытной и контрольной пробах, а также в их размере являлось критерием токсичности или экологически благоприятной среды для одноклеточного организма.
Таблица 1. Результаты определения влияния системы-суспензии на аппарат размножения и темпа роста парамеций (хронический опыт)
|
Объект Исследования |
Исходное количество парамеций в 0,05 мл |
Количество парамеций спустя 3 суток |
Размер парамеций и форма (мкм) |
Характер движения |
|
Контроль |
5-10 |
30-40 |
90-100 удлинённые |
Активны |
|
Кальций морской, сироп калины |
5-10 |
60-65 |
50-80 овальные |
Очень Активны |
|
Карбонат кальция, сироп калины |
5-10 |
40-45 |
50-80 овальные |
Активны |
|
Премикс (Д3),сироп калины |
5-10 |
80-100 |
70-90 овальные |
Очень активны |
Анализ данных, приведённых в таблице 1 показал, что вышеперечисленные испытуемые композиции в экологическом отношении благоприятны для парамеций, они стимулируют в сравнении с контролем темп размножения. Наиболее благоприятным является композиция №3 с премиксом и сиропом калины.
Следующим этапом наших исследований было изучение протективной активности изучаемой системы-суспензии по отношению к клеточным ядам: спирту этиловому и водорода пероксиду, которые создают по данным литературы патологическую модель повреждения мембраны клетки. Этиловый спирт повреждает белковую часть биомембраны, пероксид водорода инициирует ПОЛ мембраны.
Таблица 2. Изучение степени защиты парамеций от действия токсикантов по времени остановки (n=5)
|
Наименование объекта |
Время остановки парамеций в 14% этаноле, мин |
Время остановки парамеций в 1% растворе пероксида водорода, мин |
|
Контроль |
0,2 ± 0,01 |
0,09 ± 0,01 |
|
Кальций морской, сироп калины |
3,4 ± 0,01 |
1,24± 0,01 |
|
Карбонат кальция, сироп калины |
4,25± 0,01 |
2,05± 0,01 |
|
Премикс (Д3), сироп калины |
5,2± 0,01 |
2,37± 0,01 |
Таблица 3. Шкала биологической активности (протективного действия) системы-суспензии в опытах на парамециях
|
Активность вещества |
Время остановки парамеций, мин |
|
|
14% раствор этанола |
1% раствор пероксида водорода |
|
|
Высокоактивные |
от 10 и более |
от 4 и более |
|
Умеренно активные |
8-10 |
3-4 |
|
Среднеактивные |
5-8 |
2-3 |
|
Малоактивные |
Менее 5 |
Менее 2 |
Выводы: Таким образом наиболее перспективной для изучения можно признать композицию премикс (Д3) сироп калины, которая обладает умеренной протективной активностью, стимулирующей размножение парамеций, которые являются по многим параметрам схожими с клетками человеческого организма.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
- Бауман В.К. Всасывание кальция в тонком кишечнике //Регуляция фосфорно - кальциевого обмена в норме и патологии: Сб. науч.ст. Рига. 1987. С. 5-32.
- Изучение влияния фармацевтических факторов на высвобождение лекарственных веществ из лекарственных форм. Современные методы оценки качества готовых лекарственных средств: Учеб.-метод. разработка для студентов дневного и вечернего отд. фармац. ин-тов. М.: Изд-во ММА им. Сеченова. 1992. С. 50.
- Левченко В.И., Носовицкая С.И., Штейнград М.В. Сравнительное изучение эффективности консервирующих средств и разработка условий консервирования сахарного сиропа //Всесоюз. науч. конф. по совершенствованию производства лекарственных и галеновых препаратов (1969; Ташкент): Материалы... Ташкент. 1969. С. 98-99.
- Тюлькова Е.И., Семенов Д.Г., Самойлов М.О. Участие кальциевой и фосфоинозитидной систем внутриклеточной регуляции в адаптации нейронов. Материалы междунар. съезда (4; 29 июня-1 июля 2000; Великий Новгород). СПб. 2000. С. 114-115.
- Бондаренко А.И. К вопросу массово-объемного изготовления вкусовых и лекарственных сиропов //Фармация. 1984. Т. 33. №6. С.70-71.