Кафедрой фармацевтической технологии АГМУ были получены отвар (по методике ГФ XI), настойки (с использованием 20%, 40%, 60% и 80% этанола методом классической мацерации) и экстракт жидкий (40% этанол, метод перколяции). В эксперименте использована кора осины обыкновенной, соответствующая требованиям проекта ФСП «Кора осины обыкновенной», ранее разработанного на кафедре фармацевтической технологии АГМУ.
Объекты исследования очищали с помощью растворов свинца ацетата и натрия сульфата. В результате этого были получены извлечения, содержащие только простые фенольные соединения. С целью создания оптимальной концентрации для последующего хроматографического исследования фенологликозидов извлечения упаривали под вакуумом до 1/6 объема. Хроматографирование проводили методом ТСХ на пластинке «Силуфол УФ-254» в системе растворителей этилацетат-ксилол-кислота муравьиная-вода 35:1:2:2. Пятна проявляли обработкой хроматограммы 4% раствором кислоты серной в этаноле абсолютном с последующим высушиванием на воздухе и выдерживанием в сушильном шкафу 1-2 минуты при 1100 С. Результаты исследований показали, что все извлечения содержат по шесть фенологликозидов. Сравнение окраски пятен и величины RF с аналогичными данными по коре осины, ранее детально изученной на кафедре [1,2], позволило говорить об идентичности составов БАВ в объектах исследования и идентифицировать обнаруженные соединения как производное триандрина, салицин, триандрин, саликартин, вималин и популин.
Хроматографическое исследование флавоноидов, содержащихся в отваре, настойках и экстракте жидком, проводили методом ТСХ на пластинке «Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ» в системе растворителей n-бутанол-кислота уксусная-вода 5:1:4. Соединения идентифицировали по цвету флуорисценции до и после обработки хроматограмм 2% раствором алюминия хлорида. Результаты исследований показали, что все извлечения содержат по четыре флавоноида. Сравнение цвета флуорисценции пятен и величины RF с аналогичными данными по коре осины [1,2], позволяет говорить об идентичности составов БАВ в объектах исследования и идентифицировать обнаруженные соединения как хризин, гиперозид, кверцитин и рутин.
Количественное содержание фенологликозидов в объектах исследования устанавливали методом прямой спектрофотометрии с предварительной очисткой извлечений растворами свинца ацетата и натрия сульфата от сопутствующих данным БАВ веществ. При проведении анализа было установлено, что максимальное содержание фенологликозидов наблюдается в экстракте жидком (0,89%). В настойках данный показатель колеблется в пределах 0,10-0,12%, а в отваре составляет 0,08%.
Определение количественного содержания флавоноидов в отваре, настойках и экстракте жидком проводили спектрофотометрическим методом по двум методикам. В основе первой лежит реакция данных БАВ с алюминия хлоридом, ведущая к образованию комплексного соединения. В основе второй лежит реакция флавоноидов со щелочью при нагревании, приводящая к образованию окрашенных изомерных халконов. При проведении анализа было установлено, что максимальное содержание флавоноидов наблюдается в экстракте жидком (0,024% в пересчете на рутин, 0,007% в пересчете на кверцетин,0,135% в пересчете на хризин). В настойках данный показатель колеблется в пределах 0,006-0,009% в пересчете на рутин, 0,001-0,006% в пересчете на кверцетин и 0,008-0,016% в пересчете на хризин, а в отваре составляет 0,006% в пересчете на рутин, 0,001% в пересчете на кверцетин и 0,008% в пересчете на хризин.
Заключительный этап работы - определение антиоксидантной активности in vitro. Исследование проводили биохимическим методом с использованием модельной системы определения малонового диальдегида (МДА) с помощью кислоты тиобарбитуровой. Результаты анализа показали, что отвар, настойки и экстракт жидкий обладают достаточно высокой антиоксидантной активностью (АОА=45,8-77,3). Однако, у экстракта она минимальная (45,8).
Сопоставление содержания БАВ и АОА позволило сделать вывод, что антиоксидантная эффективность отвара и настоек пропорциональна содержанию фенольных соединений. Значительное увеличение содержания фенольных соединений в экстракте не обеспечило ожидаемого антиоксидантного действия. Отклонение линейной зависимости может быть связано с тем, что АОА фитопрепаратов определяется присутствием не только БАВ, но и сопутствующих веществ, способных блокировать -ОН группы фенольных соединений, вступающих в реакции окисления.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
- Талыкова, Н.М. Фармакотехнологическое исследование коры осины обыкновенной: Автореф.дисс....канд.фармац.наук.- Барнаул,1996.- 25с.
- Турецкова, В.Ф. Теоретическое и экспериментальное обоснование рационального использования коры и побегов облепихи крушиновидной и коры осины обыкновенной: Автореф. дисс.... док. фармац.наук. - Пермь, 2001.- 49с.