В литературе имеется сообщение о качественном обнаружении флавоноидов методом тонкослойной хроматографии в траве овса посевного, выращенного в Ленинградской области.
Проведенные нами ранее исследования позволили установить в траве овса посевного наличие крахмала и до 1% аминокислот, среди которых преобладает глютаминовая кислота [2].
Целью нашей работы было определение количества суммы флавоноидов в траве овса посевного, культивированного на территории Ставропольского края в фазе молочной зрелости, и изучение возможности применения его в качестве пищевой добавки.
В работе была использована трава овса посевного, из которой готовили извлечение 70% спиртом этиловым. Для обнаружения флавоноидов были использованы химические реакции и метод хроматографии в тонком слое сорбента [3,5].
Для выполнения анализа 10 мл экстракта упаривали на водяной бане до 1 мл, прибавляли 1 мл спирта этилового 95% и делили раствор на две части. К 1 мл полученного раствора прибавляли 0,1 г цинковой пыли и 1 мл кислоты хлористоводородной концентрированной. Появлялось розовое окрашивание.
Из второй части раствора отбирали 0,01 мл и наносили на линию старта хроматографической пластинки "Силуфол" (8х15 см). Одновременно на линию старта наносили 0,005 мл 0,1 % спиртового раствора государственного стандартного образца (ГСО) лютеолина. Пластинку с нанесенными пробами высушивали на воздухе в течение 5 минут, затем помещали в камеру (предварительно насыщенную в течение 1 часа) со смесью растворителей хлороформ-спирт метиловый-вода (52:28:7) и хроматографировали восходящим способом. Когда фронт растворителей проходил около 14 см, пластинку вынимали из камеры, высушивали в вытяжном шкафу в течение 10 минут и идентифицировали в УФ-свете при длине волны 360 нм. На пластинке появлялось два основных темно-коричневых пятна, которые по отношению к ГСО лютеолина имеют Rs 0,57 и 1,09 соответственно. Затем хроматограмму проявляли 5% спиртовым раствором алюминия хлорида и нагревали в сушильном шкафу при температуре 100-105°С в течение 2-3 минут. Пятна приобретали желтую окраску в видимом свете. В УФ-свете нижнее пятно имело ярко-желтую окраску (2¢-О-арабинозид изовитексина), а верхнее - ярко-желто-зеленую окраску (трицин).
Приготовление 0,1% спиртового раствора ГСО лютеолина: 0,01 г ГСО лютеолина растворяли в 10 мл спирта этилового 95%.
Приготовление 5% спиртового раствора алюминия хлорида: 5,0 г алюминия хлорида растворяли в 40 мл спирта этилового 95% в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводили до метки тем же растворителем, тщательно перемешивали.
Содержание флавоноидов в траве овса посевного определяли методом спектрофотометрии.
Методика определения флавоноидов. Аналитическую пробу сырья измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Около 1,0 г пробы (точная навеска) обрабатывали 50 мл спирта этилового 70%, взвешивали с точностью до 0,01 г и нагревали в колбе с обратным холодильником на кипящей водяной бане в течение 30 минут, периодически встряхивая для смывания частиц сырья со стенок. Колбу охлаждали, доводили до первоначальной массы тем же растворителем. Извлечение фильтровали в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводили до метки спиртом этиловым 70%. Содержимое колбы тщательно перемешивали и измеряли оптическую плотность раствора на спектрофотометре СФ-56 при длине волны 338 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения использовали спирт этиловый 70%.
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на 2¢-О-арабинозид изовитексина в процентах (Х) вычисляли по формуле:
,
где D - оптическая плотность испытуемого раствора;
353 - удельный показатель поглощения 2¢-О-арабинозид изовитексина при длине волны 338 нм;
а - навеска травы овса, взятая для анализа, г;
100 - объем мерной колбы, мл.
Результаты анализа приведены в таблице 1.
Таблица 1. Результаты определения флавоноидов в траве овса посевного
|
D |
Навеска, г |
Найдено, % |
Метрологические характеристики |
|
0,301 |
1,0082 |
0,084 |
Х=0,082 |
|
0,302 |
0,9992 |
0,085 |
S(Х-Хi)=0,000046 |
|
0,287 |
0,9814 |
0,082 |
S=0,0030 |
|
0,300 |
1,0095 |
0,084 |
Sх=0,0012 |
|
0,273 |
0,9987 |
0,077 |
DХ=0,0032 |
|
0,265 |
1,0057 |
0,080 |
e=±3,95% |
Из таблицы 1 следует, что содержание флавоноидов составляет 0,082%. Относительная погрешность анализа не превышает 3,95%.
Выводы
С помощью качественных реакций и метода тонкослойной хроматографии установлено наличие флавоноидов в траве овса посевного, культированного в Ставропольском крае.
Разработана методика дифференциального спектрофотометрического определения флавоноидов по реакции с алюминия хлоридом. Установлено, что в траве овса посевного содержится до 0,082% флавоноидов.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
- Казаков А.Л., Хацуков Б.Х. Биологически активные вещества целебных и пищевых растений и их фармакологическая активность. - Нальчик: Изд. КБНЦ РАН, 2000. - 68с.
- Куль А.Ю., Маршалкин М.Ф., Гаврилин М.В., Куль И.Я. Изучение химического состава и спектрофотометрическое определение аминокислот в траве овса посевного. Успехи современного естествознания. - 2002. - С. 6-9.
- Методы биохимического исследования растений под ред. А.И. Ермакова. - Л.: Агропромиздат, 1987. - 430 с.
- Растительные ресурсы. Рос. Академия наук. - С.-Пб.: Наука, 1994. - С.117.
- Химический анализ лекарственных растений под ред. Н.И. Гринкевича, Л.Н. Сафронича. - М.: Высш.школа, 1983. - 176с.