Цель настоящей работы заключалась в выявлении особенностей адгезивных свойств ЭО различных классов зрелости, а также сравнение адгезии ЭО к субстрату у самцов и самок крыс.
Материалы и методы. В работе были использованы интактные крысы, 10 самцов и 11 самок.
Препараты эритробластических островков (ЭО) и клеток костного мозга из бедренных костей крыс получали по методу Ю.М. Захарова и соавторов (1984). Клеточную взвесь разводили средой выделения и помещали на квадратные предметные стекла, при этом зона с разведённой клеточной взвесью была ограничена на препарате резиновым кольцом. Далее стекла помещали в термостат при Т=37°С и при 100% влажности на 45 минут. За это время ЭО и клетки костного мозга оседали и адгезировались.
Для сравнения силы адгезивного взаимодействия ЭО различных классов зрелости с субстратом нами была предложена оригинальная методика гидродинамического воздействия на препараты костного мозга. После инкубации в термостате стекла вынимали и производили смывы с областей адгезии поршневым автоматическим медицинским дозатором А-2 по 1 мл. На область адгезии первой группы стекол производили один смыв (1 мл среды Игла), второй группы стекол - пятьдесят смывов (по 1 мл среды Игла). Средняя кинетическая энергия струи жидкости (среда Игла), подаваемой из сопла дозатора, оставалась постоянной. Для расчёта гидродинамического давления мы использовали уравнение Бернулли:
Э=р+γ·h+(ρ·V2)/2=соnst, (1)
где p - «статическое давление» (пьезоэлектрический напор), давление, сжимающее частицу жидкости;
y·h - изменение давления при изменении высоты на величину h;
(ρ·V2)/2-«динамическое давление» (скоростной напор).
Преобразовав уравнение Бернулли, мы рассчитывали только гидродинамическую составляющую давления, создаваемого поршнем дозатора:
Ргидродин= (ρ·V2)/2, (2)
где р≈1000 кг/м3 (плотность среды Игла),
V=0,764 м/с (линейная скорость жидкости на выходе из сопла).
Таким образом, подставив вышеуказанные значения в уравнение (2), гидродинамическое давление жидкости оказалось равным 292 Па.
После смывов стекла центрифугировали при 1000 об/мин 40-45 секунд, фиксировали метиловым спиртом. Затем препараты окрашивали по Романовскому-Гимза. Общее количество ЭО подсчитывали на всем препарате под малым увеличением (x600), количество ЭО выражали на 1 см2 препарата. Для оценки количества ЭО различных классов (формула ЭО) зрелости препарат анализировали под большим увеличением (x1350) с масляной иммерсией. Классы зрелости ЭО оценивали в адгезированных препаратах островков, окрашенных по Романовскому-Гимза и в соответствии с классификацией Ю.М. Захарова и соавт. (1990).
Для анализа данных использовали пакеты прикладных программ Statistica (StatSoft, USA), редактора электронных таблиц MS Excel 2000. Достоверность различий определяли с критерия Колмогорова-Смирнова.
Результаты. Общее количество ЭО самцов на препаратах уменьшилось в 1,274 раза с 1283±48 (1-кратный смыв) до 1007±43 (50-тикратный смыв) на 1 см2 (р<0,05), а количество ЭО самок уменьшилось с 798±29 (1-кратный смыв) до 606±378 (50-тикратный смыв), то есть в 1,316 раза (p<0,05). Таким образом, убывание количества ЭО самок было более выраженным по сравнению с убыванием количества ЭО самцов, что свидетельствует о более слабой связи ЭО самок с субстратом. Анализ количества ЭО различных классов зрелости на 1 см2 препарата также выявил снижение их количества с увеличением кратности смывов, кроме того, мы наблюдали отличия в паттерне убывания количества ЭО разных классов зрелости. Так, количество ЭО1, ЭО11, ЭО рек. как у самцов, так и у самок уменьшалось в большей степени по сравнению с ЭО других классов зрелости. Сравнительная оценка количества ЭО1 и ЭО инв. выявила лишь тенденцию к уменьшению их количества при увеличении кратности смывов, которая не достигала уровня статистической значимости
Таким образом, предложенная нами оригинальная методика гидродинамического воздействия на препараты ЭО костного мозга позволила выявить один из аспектов функциональной гетерогенности ЭО различных классов зрелости.
Библиографическая ссылка
Щипицын М.А., Рассохин А.Г., Квиринг М.Е. ВОЗМОЖНОСТИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МОДЕЛИ, ОСНОВАННОЙ НА ВОЗДЕЙСТВИИ ГИДРОДИНАМИЧЕСКОГО ДАВЛЕНИЯ НА ПРЕПАРАТЫ КОСТНОГО МОЗГА, В ИССЛЕДОВАНИИ АДГЕЗИВНЫХ СВОЙСТВ ЭРИТРОБЛАСТИЧЕСКИХ ОСТРОВКОВ // Современные наукоемкие технологии. – 2005. – № 11. – С. 98-99;URL: https://top-technologies.ru/ru/article/view?id=26709 (дата обращения: 21.11.2024).