Научный журнал
Современные наукоемкие технологии
ISSN 1812-7320
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,940

СРАВНЕНИЕ МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА КЛЕТОК В АПОПТОЗЕ В КОСТНОМ МОЗГЕ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ МИЕЛОЛЕЙКОЗОМ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИЕЙ И ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ МИКРОСКОПИЕЙ (ПРЕДВАРИТЕЛЬНЫЕ ДАННЫЕ)

Сясина Т.В. Удальева В.Ю. Козлов А.В. Бессмельцев С.С.

Регуляторы клеточного цикла и апоптоза в настоящее время рассматриваются в качестве основных мишеней целенаправленной терапии, а изучение направленности апоптотических реакций под воздействием направленной терапии может служить лабораторным маркером эффективности терапии. Целью данного исследования явилась оценка скорости апоптотических реакций в клетках костного мозга больных ХМЛ двумя методами: флюоресцентной микроскопии и проточной цитометрией в условиях спонтанного и индуцированного дефицитом глюкозы в среде инкубации апоптоза. При люминесцентной микроскопии подсчитывали количество клеток, связавших краситель акридин оранж (АО), результат выражали в процентах от общего количества клеток. Проточную цитометриию проводили с двумя красителями - аннексин V и пропидия йодид (PI). Оценивали общее количество клеток, связавших аннексин V
(аннексин V+) и результат так же выражали в процентах.

Мононуклеарные клетки костного мозга были идентифицированы на основе CD45 флюоресценции. Анализировали три клеточных пула: недифференцированный клеточный пул по общему лейкоцитарному маркеру CD34, лимфоцитарный клеточный пул по специфическому линейному лимфоцитарному маркеру СD19. Миелоцитарый (гранулоцитраный) пул оценивали путем исключения из клеточного пула CD34+ клеток СD19+ (т.е. CD34+ СD19-).

В первую группу были включены 14 больных хроническим миелолейкозом в хронической фазе с полным и или большим цитогенетическим ответом и полным гематологическим ответом. Вторую группу составили 6 больных хроническим миелолейкозом в фазе бластного криза.

В 1-й группе количество акридин оранж связывающих клеток в условиях спонтанного и индуцированного апоптоза составило 11 и 20,5 % соответственно. Прирост был равен 9,5 %. Во 2-й группе количество акридин оранж связывающих клеток в условиях спонтанного и индуцированного апоптоза составило 3,8 и 4,5 % соответственно. Прирост был равен 0,7 %.

В 1-й группе количество клеток, связывающих аннексин V+ клеток в условиях спонтанного и индуцированного апоптоза в недифференцированном клеточном пуле 14,2 и 24,0 %, прирост составил 9,8 %, в лимфоцитарном клеточном пуле - 12,8 и 21,9 %, прирост - 9,1 %, в гранулоцитарном клеточном пуле - 23,6 и 34,2 %, прирост - 10,6 %.

В 2-й группе количество аннексин V+ клеток в условиях спонтанного и индуцированного апоптоза было равно в недифференцированном клеточном пуле 4,2 и 4,8 % соответственно, в лимфоцитарном клеточном пуле - 3,3 и 4,8 %, в гранулоцитарном клеточном пуле - 2,9 и 3,7 %. Прирост клеток в состоянии апоптоза по annexin V+ в недифференцированном клеточном пуле ̶ 0,6 %, в лимфоцитарном - 1,5 %, в гранулоцитарном - 0,8 %.

При статистической обработке (критерий Пирсона) была установлена выраженная корреляционная связь между результатами, полученными при люминесцентной микроскопии и проточной цитометрии по количеству клеток в условиях спонтанного, индуцированного апоптоза, а так же приросту количества клеток в условиях индукции коэффициент корреляции колеблся от 0,86 до 0,99.

В целом полученные данные позволяют сделать вывод о том, что вышеуказанные методы сопоставимы друг с другом и показывают выраженную корреляционную взаимосвязь. Следовательно микроскопический метод с использованием акридин оранжа является не менее чувствительным и точным, чем проточная цитометрия и может быть использован для мониторинга терапии хронического миелолейкоза. Учитывая, что акридин оранж связывается с ядерными структурами клетки, а аннексин V с фосфатидилсерином на поверхности клетки для полного представления о процессах апоптоза и их интенсивности лучше использовать эти методы в совокупности для оценки ответа на терапию в частности при хроническом миелолейкозе.


Библиографическая ссылка

Сясина Т.В., Удальева В.Ю., Козлов А.В., Бессмельцев С.С. СРАВНЕНИЕ МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА КЛЕТОК В АПОПТОЗЕ В КОСТНОМ МОЗГЕ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ МИЕЛОЛЕЙКОЗОМ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИЕЙ И ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ МИКРОСКОПИЕЙ (ПРЕДВАРИТЕЛЬНЫЕ ДАННЫЕ) // Современные наукоемкие технологии. – 2011. – № 1. – С. 63-64;
URL: https://top-technologies.ru/ru/article/view?id=26624 (дата обращения: 16.07.2024).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1,674