Исследование проведено на 81 половозрелой морской свинке-самцах, массой 400-450 гр., из которых 51 была использована в эксперименте, а 30 - служили в качестве контроля. Содержание морских свинок проводилось в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей (Страсбург, 1986). Перед проведением эксперимента морские свинки адаптировались к условиям лаборатории с целью исключения стрессового фактора 3-5 раз подвергались «ложному» воздействию с включенной аппаратурой, но отсутствием самого излучения. Экспериментальные животные подвергались воздействию однократного общего рентгеновского излучения (доза-5 Гр, 0,64 Гр/мин., фильтр-0,5 мм Си, напряжение-180 кВ, сила тока-10 мА, фокусное расстояние-40 см). В качестве источника рентгеновского излучения был использован рентгеновский аппарат «РУМ-17». Облучение производилось в одно и то же время суток - с 10 до 11 часов в осеннее-зимний период. Выведение животных из эксперимента и забор материала производился сразу, через 6 часов, на 1, 5, 10, 25 и 60-е сутки после окончания воздействия. Кусочки кожи были взяты из различных областей (голова (щека), спина, живот). Для гистологического изучения был использован материал, фиксированный в 12% нейтральном формалине, затем залитый в парафин, из которого изготавливались срезы толщиной 7 мкм, которые окрашивались по традиционной методике - гематоксилином и эозином, по Ван-Гизону в модификации Вейгерта. Также был использован ряд гистохимических методик. На белки срезы кожи окрашивались 0,1% водным и насыщенным сулемовым растворомами бромфенолового синего (БФС). Гликозаминогликаны выявлялись окраской срезов 1% раствором альцианового синего при рН-1,0 и рН-2,5 с постановкой соответствующих контролей и 0,5% раствором толуидинового синего для выявления метахромазии. На гликопротеиды и нейтральные мукополисахариды срезы окрашивались путем постановки ШИК-реакции по MacManus. Контроль на гликопротеиды и нейтральные мукополисахариды производился путем обработки срезов амилазой. Для выявления РНК использовался метод окраски срезов по Браше. Часть объектов, для выявления РНК и ДНК, окрашивалась с помощью хромово-квасцового галлоцианина по Эйнарсону. Для электронной микроскопии участки кожи фиксировали в 2,5% глютаральдегиде на 0,2 М кокадилатном буфере (рН-7,2), постфиксировали в 1% растворе осмиевой кислоты. Все образцы пропитывали и заливали в аралдит. Срезы получали на ультратоме LKB-III (Швеция). Полутонкие срезы окрашивали толуидиновым синим, ультратонкие контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца, просматривали и фотографировали в электронном микроскопе JEM-100 CX II (Япония). Проводился гематологический контроль (подсчет общего количества эритроцитов и лейкоцитов).
При микроскопическом исследовании гистологических препаратов на протяжении 1-х суток после окончания действия рентгеновских лучей со стороны клеток дермы кожи всех участков локализации отмечается снижение, по сравнению с контролем, сродства цитоплазмы к кислым красителям. Ядра отдельных клеток, в том числе фибробластов, округляются, а в кариоплазме выявляется 1, реже 2, гиперхромных ядрышка. На 5-е сутки после окончания действия рентгеновских лучей интенсивность окраски цитоплазмы большинства клеток сосочкового и сетчатого слоев дермы кожи кислыми красителями снижена. Часть указанных клеток были набухшие, с нечеткими границами. В данных клетках отмечается снижение интенсивности пиронинофилии, которое проявляется в виде слабо-красного диффузного окрашивания, при окраске по Браше. В отдельных фибробластах пиронинофильное вещество выявляется лишь около цитолеммы. Снижается, по сравнению с контролем, и интенсивность окраски цитоплазмы большинства клеток дермы кожи водным и насыщенным сулемовым раствором бромфенолового синего, что свидетельствует о снижении содержания в указанных клетках основных и суммарных белков. На 10-е сутки после окончания воздействия рентгеновского излучения при электронной микроскопии в ряде полей зрения обращает на себя внимание изменения со стороны фибрилл коллагена, что проявляется неравномерной оптической плотностью, истончением фибрилл и наличием очагов лизиса последних. В отдельных фибробластах, расположенных рядом с указанными участками фибрилл, внутриклеточно возникают формы конденсации коллагена, в частности в виде глобул в образовавшихся цитоплазматических пустотах, которые вероятнее всего являются цистернами эндоплазматической сети (ЭПС), наряду с этим в цитоплазме фибробластов выявляются актин-миозиновые цитофиламенты. Гистохимически участки усиленного синтеза фибрилл характеризуются фуксинофилией, в то время как в местах дезорганизации коллагеновых волокон выявляется пикринофилия и ү-метахромазия, которая свидетельствует о накоплении между разрушающимися фибриллами коллагена кислых гликозаминогликанов (ГАГ). На 25-е сутки после окончания действия Х-лучей в сетчатом слое дермы отмечается повышение сродства к кислому фуксину значительной части коллагеновых волокон, а также выявляются крупные, достигающие 60-65 мкм, фибробласты. В ядрах указанных фибробластов глыбки хроматина распылены, чаще выявляются 1-2 ядрышка, одно из которых нередко смещено к кариолемме. Цитоплазма данных клеток слабобазофильна. В сальных железах цитоплазма большинства клеток камбиального слоя слабо окрашивается эозином, а их ядра гематоксилином. Ядра указанных клеток увеличены в размерах, чаще имеют овальную форму, нередко содержат гиперхромные, увеличенные в размерах, ядрышки, интенсивно окрашиваемые гематоксилином, и метиловым зеленым, при окраске по Браше. На препаратах кожи, окрашенных по Ван-Гизону, в отдельных участках подкожножировой клетчатки выявляются тонкие коллагеновые волокна. Вокруг единичных липоцитов отмечается скопление макрофагов. На 60-е сутки после воздействия рентгеновского излучения значительная часть коллагеновых волокон интенсивно окрашивается фуксином. Сродство ядер и цитоплазмы большей части фибробластов к гематоксилину и эозину, а также галлоцианину, при окраске по Эйнарсону, повышено, в отдельных из клеток выраженное настолько значительно, что выявить их подробное строение не представляется возможным. В соединительной ткани сосочкового и сетчатого слоев дермы, наблюдаются отдельные клетки с явлениями вакуолизации цитоплазмы и гиперхромными ядрышками.
Полученные данные свидетельствуют о выраженных морфофункциональных изменениях клеточных элементов дермы кожи различных участков локализации при воздействии рентгеновского излучения, наблюдаемых на протяжении всего периода наблюдений (60 суток).
Библиографическая ссылка
Мельчиков А.С., Мельчикова Н.М., Рыжов А.И. МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ КЛЕТОК ДЕРМЫ КОЖИ МОРСКИХ СВИНОК ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ РЕНТГЕНОВСКОГО ИЗЛУЧЕНИЯ // Современные наукоемкие технологии. – 2007. – № 6. – С. 34-35;URL: https://top-technologies.ru/ru/article/view?id=24981 (дата обращения: 20.04.2024).