Об активности протеолитических ферментов печени судили по изменению оптической плотности при 280 нм (по количеству тирозина) в гомогенате печени после осаждения нерасщепленного белка трихлоруксусной кислотой. Протеолиз осуществляли в средах с рН 5,6; 7; 10 до и после инкубации гомогената печени крыс при 37Со в течение 60 мин.
Активность протеолитических ферментов в печени исходно до инкубации была различной в средах с разными значениями рН. Так, количество тирозина, образовавшегося в щелочной среде, оказалось достоверно больше, чем в нейтральной среде, и составило 0,133+0,011у.е., в нейтральной среде - соответственно 0,103+0,010 у.е., в кислой - 0,117+0,015 у.е. После инкубации гомогената при 37Со в течение 60 мин. отмечено достоверное увеличение скорости протеолиза в кислой, щелочной и нейтральной средах. При этом количество тирозина, образовавшегося при рН 10, оказалось достоверно выше по сравнению с количеством тирозина, образовавшегося в среде с рН 5,6. Увеличение скорости протеолиза с увеличением рН в первую очередь связано с приближением значений рН к оптимуму действия щелочных протеолитических ферментов печени. Таким образом, при данных условиях инкубации (37Со, 60 мин) оказались наиболее активными щелочные протеолитические ферменты печени, оптимум действия которых при рН 10.
Показано, что параллельно с увеличением активности протеолиза в кислой, щелочной и нейтральной средах после инкубации гомогената печени (37Со, 60 мин) происходит увеличение «молекулы средней молекулярной массы» (МСМ). Так, после инкубации количество тирозина в нейтральной среде увеличилось с 0,103+0,010 до 0,181+0,042, в кислой среде - с 0,117+0,015 до 0,135+0,018, в щелочной среде - с 0,133+0,011 до 0,230+0,033, и соответственно возросло количество веществ, определяемых при 254 нм, в нейтральной среде - с 0.238+0,037 до 0,310+0,003, в кислой среде - с 0,256+0,041 до 0,279+0,052 и в щелочной среде с 0,285+0,038 до 0,406+0,061. Наибольшее количество веществ «МСМ» образовалось в щелочной среде, наименьшее - в кислой, что соответствует интенсивности протеолиза при различных значениях рН. Таким образом, можно предположить, что часть «МСМ» образуются в результате расщепления пептидных связей в подвергающихся гидролизу белках.
С.Г. Галактионов (1984) и др. указывают на то, что для патологий, сопровождающихся появлением значительного количества «МСМ», характерно повышение активности протеиназ крови. Ряд веществ из группы «МСМ», а также их предшественники были идентифицированы С.Г.Галактионовым и др. (1984). Значительную часть «МСМ» составляют пептиды - продукты деградации фибрина, фибриногена, сывороточного альбумина. Однако, большая часть веществ группы «МСМ», как и их предшественники, остается не идентифицирована.
Т.Л. Заец (1973) были проведены специальные исследования, данные которых позволили автору прийти к выводу о том, что повышение протеолиза в интактных тканях связано с усилением активности собственно тканевых катепсинов. Вместе с тем, непосредственная причина, приводящая к активации протеолитических ферментов, остается окончательно не установленной. По данным Т.Л.Заец, ни введение сыворотки крови обожженных животных, ни введение гистамина, ни введение безбелкового прокипяченного экстракта из органов животных, подвергнутых ожогу, не приводили к изменению протеолитической активности тканей. Результаты этих исследований позволили Т.Л. Заец исключать непосредственное воздействие на активность тканевых катепсинов каких-либо соединений, которые, всасываясь из очага термического воздействия, могли бы поступать в ткани.
Проведенные нами ранее исследования показали, что введение интактным крысам «МСМ», полученных из печени обожженных крыс, также как и термическая травма, вызывает снижение активности фермента биотрансформации альдегиддегидрогеназы в печени и эритроцитах, и изменение кинетических показателей альдегиддегидрогеназной реакции.
В данном опыте в кислой среде (рН 5,6) под влиянием сыворотки крови обожженных крыс также не наблюдалось достоверного увеличения активности протеолитических ферментов в гомогенате печени. В то же время в щелочной и нейтральной средах под влиянием сыворотки крови обожженных крыс происходит достоверное увеличение активности протеолитических ферментов: количество тирозина в среде с рН 10 возросло с 0,069+0,004 у.е. до 0,117+0,016 у.е., в среде с рН 7 - с 0,068+0,002 до 0,093+0,012 у.е. При этом достоверных различий между активностями протеолитических ферментов в средах с рН 5,6; 7 и 10 после инкубации гомогената печени с сывороткой не наблюдалось.
Активность протеолиза в кислой, щелочной и нейтральной средах до инкубации с сывороткой крови обожженных крыс была также приблизительно одинаковой (количество тирозина составило 0,069+0,003). Таким образом, сыворотка крови обожженных животных оказывает активирующее воздействие на активность щелочных и нейтральных протеолитических ферментов после инкубации при 37Со в течение 60 мин, и не влияет на активность кислых протеиназ печени.
Таким образом, увеличение скорости протеолиза с ростом рН возможно связано с приближением значений рН к оптимуму действия щелочных протеолитических ферментов печени при данных условиях инкубации (37Со, 60 мин.). Показано, что сыворотка крови обожженных животных оказывает активирующее влияние на активность щелочных и нейтральных протеолитических ферментов печени крыс. Так как количество «МСМ» увеличивается параллельно с ростом интенсивности протеолиза, можно предположить, что часть «МСМ» образуется в результате гидролиза белков.
Работа представлена на научную международную конференцию «Современные проблемы экспериментальной и клинической медицины», Бангкок, Паттайа (Тайланд), 20-30 декабря 2007 г. Поступила в редакцию 10.12.2007.
Библиографическая ссылка
Соловьева А.Г. ВЛИЯНИЕ СЫВОРОТКИ КРОВИ ОБОЖЖЕННЫХ ЖИВОТНЫХ НА АКТИВНОСТЬ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ ПЕЧЕНИ КРЫС // Современные наукоемкие технологии. – 2008. – № 1. – С. 94-96;URL: https://top-technologies.ru/ru/article/view?id=23093 (дата обращения: 17.08.2024).