Нами проведен анализ модельных растворов содержащих одновременно цистеин, гомоцистеин и глутатион методом ОФ ВЭЖХ с прямой УФ и флуоресцентной детекцией. Найдены оптимальные условия, включая систему элюентов, позволяющие провести полное разделение определяемых компонентов и возможность количественной оценки концентраций в указанном выше диапазоне. В зависимости от определяемой концентрации воспроизводимость анализа по площади пика составляет 0,8-4,3%, а по времени удерживания - 0,1-2,1%. Время анализа - 20 мин. Оптимизирована стадия дериватизации аминотиолов. В качестве флуоресцентной метки использовали монобромбиман. Изучена зависимость выхода реакции дериватизации от рН реакционного объема. Показано, что чувствительность флуресцентной детекции на порядок превышает чувствительность прямой УФ. Предел чувствительности детектирования по флуоресценции составил » 1-2,5 нм/мл, что позволяет определить патологию пониженного содержания гомоцистеина в крови. Каждое из исследуемых соединений выделено из смеси и охарактеризовано масс - спектрометрически.
Параллельно проводили разделение и идентификацию аминотиолов в модельных образцах методом капиллярного электорофореза с прямым УФ детектированием. В качестве метки также использовали монобромбиман (lmax = 234, 250 нм). Проведено полное разделение смесей содержащих цистеин, гомоцистеин и глутатион. Разделение методом мицеллярной электрокинетической хроматографии дает значительно лучшие результаты, чем метод классического зонального электрофореза. Лучшие результаты достигнуты при исползовании боратных буферных растворах (рН 10,5). В качестве детергента служил додецилсульфат натрия. Предел чувствительности детекции по поглощению составляет » 25 нм/мл. Время анализа не превышает 14 мин.
Полученные результаты позволили сделать вывод о возможности количественного определения указанными методами содержания цистеина, гомоцистеина и глутатиона при их совместном присутствии в диапазоне концентраций 2,5-100 нм/мл. Чувствительность определения методом ОФ ВЭЖХ с флуоресцентной и прямой УФ детекцией несколько выше чувствительности метода капиллярного электорофореза с прямой УФ. В то же время метод капиллярного электорофореза обеспечивает получение более ясной картины разделения. Это позволяет проводить качественный анализ сложных смесей, содержащих низкомолекулярные аминотиолы.
Библиографическая ссылка
Мельников И.О., Назимов И.В., Глубоков Ю.М. АНАЛИЗ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ АМИНОТИОЛОВ МЕТОДАМИ КАПИЛЛЯРНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА И ОФ ВЭЖХ С ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ И ПРЯМОЙ УФ-ДЕТЕКЦИЕЙ // Современные наукоемкие технологии. – 2005. – № 3. – С. 40-41;URL: https://top-technologies.ru/ru/article/view?id=22406 (дата обращения: 19.04.2024).