Цель работы - изучение влияния лектина клещевины (ЛК) на цитотоксическую активность мононуклеарных лейкоцитов (МЛ) периферической крови здоровых доноров в условиях культурального роста.
МЛ выделены из стабилизированной гепарином периферической крови 20 здоровых доноров. Кровь, разведенную средой 199, центрифугировали в градиенте плотности фиколла-урографина. Мононуклеарные лейкоциты, образовавшие интерфазное кольцо, собирали пипеткой и трехкратно отмывали в среде 199. Для дальнейшего использования в эксперименте культивировали клетки эритробластного лейкоза К-562 и колоректального рака Соlo в среде RPMI-1640 с добавлением глютамина, 5% эмбриональной телячьей сыворотки и гентамицина.
При исследовании влияния лектина клещевины на цитотоксическую активность МЛ крови человека предварительно определяли прямое цитотоксическое действие ЛК на клетки линии К-562 и Соlo и на мононуклеарные лейкоциты путём введения в культуры различных концентраций препарата (от 0,05 до 0,25 мг/мл). Для выявления цитотоксической активности МЛ использовали тест восстановления 3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) 2,5-дифенилтетразолия бромида (МТТ-тест), являющимся одним из основных методов оценки жизнеспособности и пролиферативной активности клеток. Цитотоксическую активность МЛ определяли на линиях К-562 и Colo. Опухолевые клетки (1´106 в 1 мл) инкубировали в культуральной среде с обработанными лектином клещевины МЛ в соотношении 1:5 в микропланшетах (используемые концентрации ЛК - 0,01-1,0 мг/мл). Затем в лунки добавляли витальный краситель МТТ и по оптической плотности, измеряемой на мультискане МS, рассчитывали процент лизиса опухолевых клеток (процент цитотоксичности).
Было выяснено, что ЛК практически не вызывал разрушения мононуклеарных лейкоцитов в концентрации ниже 0,2 мг/мл. Однако жизнеспособность опухолевых клеток обеих линий понижалась в среднем до 80% уже при введении минимальных доз препарата (0,05-0,15 мг/мл).
Выявлено значительное повышение цитотоксичности МЛ в большей степени по отношению к лейкозным клеткам К-562 и в меньшей - к клеткам опухоли Colo в присутствии, в основном, низких концентраций ЛК (0,01-0,1 мг/мл). Введение же в культуры МЛ более высоких доз лектина клещевины (от 0,1 до 1,0 мг/мл) приводило к резкому падению цитотоксической способности лимфоцитов. Вероятно, это обусловлено чрезмерной активацией иммунокомпетентных клеток и увеличением секреции ими цитокинов, особенно фактора некроза опухолей, который в высоких концентрациях вызывает явления апоптоза клеток.
Таким образом, только подбор оптимальных доз лектина клещевины может способствовать повышению цитотоксической активности мононуклеарных лейкоцитов периферической крови человека в условиях культурального роста.
Библиографическая ссылка
Ахматова Н.К., Лебединская О.В., Киселевский М.В., Шехмаметьев Р.М., Лебединская Е.А., Мелехин С.В. ИССЛЕДОВАНИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ СВОЙСТВ МОНОНУКЛЕАРНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ КРОВИ ЗДОРОВЫХ ДОНОРОВ ПРИ ДЕЙСТВИИ ЛЕКТИНА КЛЕЩЕВИНЫ // Современные наукоемкие технологии. – 2006. – № 2. – С. 32-32;URL: https://top-technologies.ru/ru/article/view?id=22385 (дата обращения: 24.11.2024).