Scientific journal
Modern high technologies
ISSN 1812-7320
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,940

Personal portfolio

Современная серодиагностика опирается на исследования, направленные на модернизацию классических методов анализа и разработку новых [5,6], и в научной литературе имеется достаточное количество работ, посвященных сравнительной оценке качеств серологических тестов, а также перспектив их применения. При этом, к примеру, указывается, что совпадения положительных и отрицательных результатов, иммуноферментного метода (ИФА) с традиционными РСК (реакции связывания комплементы) или РНГА (реакция непрямой гемагглютинации) при выявлении антител к различным антигенам могут колебаться от 71% до 93% [2.3]. Таким образом, РНГА в классическом варианте вполне сравнима с ИФА. Следовательно, повышая качественные характеристики тест-систем для РНГА, можно превысить ИФА по основным критериальным позициям (чувствительность и стабильность). Специфичность РНГА всегда считалась весьма высокой, к достоинствам метода можно отнести его практичность и доступность. Совершенствование классической РНГА ведется по нескольким направлениям: получение высокоиммуногенных антигенных препаратов, использование полифункциональных конъюгирующих компонентов, модификация условий постановки реакции, разработка способов повышения специфической активности и сохранности тест-систем [2]. Не умаляя важности каждого из этих направлений, хотелось бы обратить особое внимание на роль коньюгатов в дизайне тест-систем. Вещества, обычно используемые для связывания иммуноактивных частиц с поверхностью эритроцита (глутаровый альдегид, гидрохинон, хлорид хрома) часто не обеспечивают воспроизводимости результатов и стабильности тест-систем при хранении, наблюдаются явления спонтанной агглютинации эритроцитов. Связывают это с тем, что конъюгация с применением данных низкомолекулярных веществ основана на образовании донорно-акцепторных (глутаровый альдегид, гидрохинон) или координационных (хлор хрома) связей между сенсибилизирующим белком и поверхностью эритроцита. При этом реакция контролируется кинетическими факторами: образующиеся связи достаточно прочны, но в этом случае система эритроцит-белок оказывается в термодинамически неравновесном состоянии. При хранении таких ЭД происходит постепенное изменение конформаций макромолекулярных цепей, что обусловливает нестабильность их свойств.

Многолетние исследования по использованию синтетических полимеров, относящихся к классу водорастворимых, позволили нам обосновать перспективность их применения в качестве коньюгатов при конструировании ЭД как на основе бактериальных, так и вирусных антигенов (в работе использовались коммерческие и эталонные штаммы бифидобактерий; бактериальная вакцина «Кодивак» на основе клеточных стенок нетоксигенных коринебактерий дифтерии, автор вакцины Шмелева Е.А.; HBs-антиген). В качестве конъюгирующих компонентов применялись стандартный 0,3% хлорид хрома (CrCl3×6H20) и предлагаемый нами синтезированный полимер ПВИ (поли-1-винилимидазол) в концентрации 0,01 мг/мл. Эритроциты барана, формалинизированные по Weinbach R. (1959), служили носителями антигена. Контроль проводился с помощью гипериммунных сывороток крови животных (мыши, кролики) и образцов сывороток крови людей (более 1500). Сравнительная характеристика полученных диагностикумов показала, более, чем в 8 раз, повышенную чувствительность оригинальных тест-систем по сравнению с традиционными, что приближает их к методам ИФА [3]. Полагаем, что высокая стабильность ЭД, кроме ковалентных и ионно-водородных связей, обеспечивается дополнительным взаимодействием гидрофобных радикалов неполярных аминокислот с гидрофобными группами синтетических полимеров [1,4]. Сочетание значимых характеристик оригинальных ЭД с их простотой и доступностью предполагает эффективное их использование при проведении популяционных исследований.

Список литературы

  1. Анненков В.В., Лещук С.И., Сердюк Л.В., Попкова С.М. и др. Современные подходы к конструированию препаратов в иммунотехнологии // Бюл.ВСНЦ РАМН, №9 - 2004. - С.50-54.
  2. Кокорев В.С. Методология повышения диагностической эффективности вирусных препаратов /000 «Центр иммунной биотехнологии» - г. Екатеринбург.-2000.-С. 350.
  3. Никитин В.М. Справочник методов иммунологии.-Кишинев:Штиинца - 1982.-304 с.
  4. Юринова Г.В. Совершенствование технологии приготовления эритроцитарных иммунодиагностикумов для РПГА на основе клеточных фракций бифидобактерий с использованием синтетических полимеров/Дисс. канд.биол.наук - Улан-Удэ.-2005.
  5. Laemmli U.K. Cleavage of proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4/Nature. - 1970.-V. 227. -Р.680-685.
  6. Petit I.F. Structura chimique de la paroi des mycobacteries /Ann.microbiol.-1978.-Vol.129.-№ 1. - P.39-48.