Представленного исследования - оценка влияния метотрексата на некоторые показатели микробиоценоза толстой кишки белых беспородных мышей при различных дозах и способах введения препарата.
Исследования микрофлоры кишечника проведены на белых беспородных мышах-самках массой 30 ± 3 г. Контрольные и опытные группы состояли из 10 животных. Использован препарат Веро-метотрексат, 1%-ный раствор натриевой соли метотрексата для инъекций (ЗАО «Верофарм», Москва). Пути введения - внутрижелудочный и внутрибрюшинный. Внутрижелудочное введение препарата осуществляли с помощью атравматического зонда. В соответствии с рекомендациями «Руководства по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (Москва, 2000) дозы, применяемые у человека, увеличивали в 11,8 раза. Дозы метотрексата составили 1,33, 1,67 и 2,67 мг/кг. Введение препарата осуществляли через день в течение двух недель. Мыши контрольных групп получали 0,5 мл дистиллированной воды. Исследование микрофлоры проводили через 2 недели после начала введения, использовали питательные среды производства ГНЦ прикладной микробиологии и биотехнологии (г. Оболенск). Оценивали суммарное число аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, число типичных кишечных палочек и гемолитических микроорганизмов. Статистическую обработку полученных данных проводили на IBM PC совместимом компьютере с помощью программ STATISTICA (StatSoft, Inc.) релиз 7.0и Primer of Biostatistics (Stanton A. Glantz, McGraw Hill) версия 4.03 в среде WINDOWS.
Распределение значений оцениваемых показателей отличалось от нормального, поэтому для оценки различий между группами использовали непараметрический дисперсионный анализ по критерию Крускала-Уоллиса и множественные сравнения по критерию Данна. Сравнение двух групп (внутрибрюшинное и внутрижелудочное введение) осуществляли с использованием критерия Манна-Уитни.
Через 2 недели наблюдалось повышение общего числа аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов; данный эффект имел дозозависимый характер (см. таблицу 1).
Таблица 1. Общее число аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов в фекалиях мышей, получавших метотрексат (внутрижелудочно)
|
Доза, мг/кг |
Значение показателя, млн КОЕ / г фекалий (медиана) |
|
0 (контроль) |
75,41 |
|
1,33 |
286,68 |
|
1,67 |
459,00* |
|
2,67 |
769,00* |
* - статистически достоверные различия с контрольной группой, P<0,05
Различия в высеваемости типичной кишечной палочки и гемолитических микроорганизмов имели статистически недостоверный характер.
Статистически достоверных различий между показателями микрофлоры при внутрибрюшинном и внутрижелудочном введении не выявлено, но имелась тенденция к более выраженному повышению общего числа аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов при внутрибрюшинном введении по сравнению с внутрижелудочным.
Таким образом, введение метотрексата в относительно невысоких дозах уже в ранние сроки вызывает статистически достоверные изменения в микрофлоре толстой кишки. Наблюдаемые эффекты имеют дозозависимый характер. Характер пути введения (энтеральный или парентеральный) не оказывает значимого влияния на выраженность изменений оцениваемых показателей; следовательно, проявление описанных эффектов не зависит от непосредственного контакта препарата с содержимым просвета кишки.