Цель работы - сравнительное изучение динамики фагоцитарной активности незрелых дендритных клеток и ДК, активированных фактором некроза опухолей (ФНО-α) и вакциной Иммуновак-ВП-4, содержащей антигены условно-патогенных микроорганизмов.
Для получения дендритных клеток использованы клетки костного мозга 20 мышей линии СВА. Костный мозг переводили в полную культуральную среду, содержащую гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор и интерлейкин-4 - для генерации ДК. Затем заменяли среду с добавлением в неё вакцину Иммуновак-ВП-4 (25 мкг/мл) или ФНО-α (20нг/мл), способствующих образованию зрелых дендритных клеток.
Фагоцитарную активность ДК оценивали по поглотительной способности в отношении штаммов St. aureus: 0,4 мл взвеси культуры ДК (10х106 кл/мл) смешивали с 0,6 мл взвеси микробных клеток (1х109 кл/мл) и инкубировали в течение 5, 30 минут, 1,5 и 3-х часов. Далее клетки отмывали средой 199, готовили мазки из клеточной взвеси. Остатки помещали в термостат, готовили мазки повторно через указанные интервалы времени и окрашивали азур II - эозином.
Определяли фагоцитарный индекс (ФИ) - процент клеток, вступивших в фагоцитоз и фагоцитарное число - среднее число бактерий, находящихся внутриклеточно (частное от деления общего числа поглощённых бактерий на число клеток, вступивших в фагоцитоз). Оба показателя рассчитывали в мазках, сделанных после 30-минутной и 1,5-3 часовой инкубации. Незрелые ДК активно фагоцитировали бактерии по сравнению с ДК, активированными вакциной Иммуновак-ВП-4 и ФНО-α. Уже через 5 мин. после введения культуры S. aureus в среду с незрелыми дендритными клетками ФИ составил 23,1%. В последующие сроки наблюдения фагоцитарный индекс повышался до 55,1-57,2%. При добавлении в среду культивирования ФНО-α фагоцитарная активность ДК была существенно ниже (через 5 мин. ФИ равнялся 5,1%, а в дальнейшем увеличивался только до 11,7-12,4%). По сравнению с ФНО-α, фагоцитарный индекс при использовании вакцины ВП-4 повышался (через 5 мин. - 12,6%, а после 3-х часов инкубации составлял 18,3%). Уменьшение фагоцитарной активности зрелых ДК является, вероятно, результатом фенотипических изменений, происходящих с ними (в частности изменением уровня экспрессии рецепторов, опосредующих взаимодействие с бактериальными компонентами).
Таким образом, из исследуемых иммуномодуляторов (ФНО-α и вакцина ВП-4) наилучшим индуктором созревания дендритных клеток, обладающих более высокой фагоцитарной активностью, явилась поликомпонентная вакцина Иммуновак-ВП-4.