Целью наших исследование является изучение влияния электрохимически активированной (ЭХА) воды на активность каталазы семян озимой пшеницы сорта Безостая 1, а также изучение кинетики ферментативной реакции и определение ее кинетических параметров.
Для определения кинетических параметров активности фермента был использован традиционный способ линеаризации зависимости скорости ферментативной реакции от концентрации субстрата (И.В. Березин, А.А. Колесов,1976).
Определение активности каталазы в семенах пшеницы под действием ЭХА воды проводили газометрическим методом. Активность фермента определяли регистрируя скорость расщепления субстрата с выделением кислорода в мл/сек и использовали для нахождения значений V и 1/V. Начальную скорость реакции определяли при разных концентрациях субстрата. Концентрация фермента [E0] была установлена в семенах в соответствии с эталоном и соответствует значению 3×10-9 моль. В качестве эталона использован препарат каталазы производства фирмы Albiochem, США. Определение ферментативной активности проводили при 220С.
Экспериментальные данные были представлены в координатах Лайнуивера-Берка (1/V, 1[S0]), или в координатах «двойных обратных величин»». Как следует из выражения
График зависимости имел вид прямой линии пересекающей ось абсцисс и ординат в точках 1/KM(каж) и 1/Vm соответственно.
Значение полученных кинетических параметров ферментативной реакции представлены в таблице.
Результаты проведенных исследований указывают на то, что действие ЭХА воды на семена пшеницы увеличивает в одинаковой степени значения Vm и KM(каж), что соответствует процессу бесконкурентной активации.
Таблица 1. Кинетические параметры ферментативной активности каталазы в семенах пшеницы
|
№ п/п |
Наименование |
KM(каж), мг/мл |
Vm ×10-2, E ×сек -1 |
Ккат×107, E/сек×М |
|
1 |
Семена (контроль) вода без электрохимической обработки |
1,16 |
3,70 |
1,23 |
|
2 |
Семена (опыт) щелочная фракция ЭХА воды |
1,28 |
4,54 |
1,67 |