В работе представлены данные, характеризующие динамику изменения содержания ДНК, РНК и белка во фракциях хроматина, различающихся прочностью прикрепления к ядерному матриксу, в периоды активно регенерирующей печени мышей с неодинаковым уровнем активной транскрипции (1-3 часов) и репликации (14-24 часов).
Частичную гепатэктомию проводим с удаление 2/3 печени. Ядра выделяли из клеток печени по методу Шаво. Хроматин из ядер клеток печени мышей экстрагировали с использованием ТМ-буфера, после предварительной активацией эндогенной Ca2+/Mg2+ ДНКазы [2]. В результате экстракции ТМ-буфером с добавлением NaCl возрастающей концентрации выделены следующие фракции хроматина: хроматин-1 (Хр-1), хроматин-2 (Хр-2), хроматин высоко солевой (Хр-ВС), хроматин (ядерный матрикс) (Хр-ЯМ) [1]. ДНК определяли методом Дише, РНК определяли с орцином, общий белок измеряли по методу Бредфорд.
Во фракции хроматина ХР-1 наблюдается изменение уровня ДНК в зависимости от времени гепатэктомии Так уровень ДНК максимален на 21,5 час и выше контроля на 70%
Уровень ДНК в ХР-1 минимален на 1 часу составляя 50 % от контроля. Уровень белка данной фракции максимален на 3 часу и выше контроля на 750% в остальные часы белок остается на достаточно высоком уровне и не опускается ниже контроля. Уровень белка ХР-2 максимален на 14,5 часу и выше контроля на 300% в остальные часы белок остается на высоком уровне и только на 21,5 часе достигает контроля.
Хр-ВС, представляющий собой дезоксирибонкулеопротеидный комплекс В этой фракции уровень ДНК максимален 14,5 часу и составляет 70% контроля, минимальная концентрация ДНК наблюдается на 1 часу и составляет 21 % от контрольной фракции. Уровень белка Хр-ВС максимален на 3 часу и выше контроля на 150% в остальные часы белок остается на высоком уровне и только на 21,5 часе достигает контроля.
Хр-ЯМ составляет 5-15 % основного хроматина обогащена негистоновыми белками такими как HMG14 и HMG17 также с этой фракцией связана РНК-полимераза I и II, топоизомераза II. В этой фракции хроматина уровень ДНК максимален 14,5 часу и выше контроля на 250%, минимальная концентрация ДНК наблюдается на 1 часу и составляет 21 % от контрольной фракции. Уровень белка Хр-ЯМ максимален на 14,5 часу и превышает контроле на 390% в остальные часы белок остается на высоком уровне и только на 21,5 часе начинает приближаться к контролю.
Уровень продукции РНК зависит от времени частичной гепатэктомии Так максимальный уровень РНК приходиться на 3 часа пик транскрипции.
Таким образом, при частичной гепатэктомии содержание ДНК, РНК и белка в разные строки наблюдение колеблется в весьма широких пределах. Динамик а ДНК характеризует репликативную активность, а динамик РНК и белка транскрипционную.
Генетические процессы в данной экспериментальной модели регенерирующей печени характеризуются определенной периодичностью. В то же время хроматин, различающийся прочностью прикрепления к ядерному матркису, имеет ряд специфических черт, характеризующих периодичность его вовлечения в тот или иной генетический процесс.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
- Бойков П. Я., Костюк Г. В., Терентьев А. А., Шевченко Н. А.. Концентрирование протоонкогенов в ядрах гепатоцитов// Молекулярная биология Т.29.Вып 5. 1995. с.1137-1144.