Проведен анализ у 128 крыс линии WAG/Rij, 70 из которых имели генотип А1/А1 и 68 А2/А2 по локусу Taq 1 A DRD2. Для генетического анализа ДНК была выделена из лимфоцитов периферической крови с использованием метода Мэтью (1984). Амплификацию локуса TAG 1А DRD2 проводили с помощью метода полимеразной цепной реакции синтеза ДНК (ПЦР) на амплификаторе «Терцик» производства г. Пущино с использованием ДНК-полимеразы Thermus aquaticus (производства фирмы «Силекс», г. Москва). Праймеры:
5 GAG ATT GGG CTT CTC CGG AT 3
5 CCC CCT GGA TAC ATC AGC TC 3
были подобраны с помощью программы Primer3 (http://frodo.wi.edu/primer3). После денатурации (3 мин при 94°С) выполняли 34 цикла амплификации по схеме: отжиг праймеров - 30 с при 94 °С, синтез ДНК - 1 мин 30 с при 59 °С, денатурация - 1 мин при 72 °С. Затем пробы выдерживали 5 мин при 72 °С, охлаждали. Для выявления полиморфизма 10 мкл реакционной смеси обрабатывали 5 единицами рестриктазы BamHI. В результате реакции аллель G локуса BamHI 145 пар оснований оставался интактным, а C подвергался ферментативному гидролизу. Длины фрагментов С были равны 128 и 17 пар оснований. Результаты рестрикционного анализа оценивали при проведении электрофореза в 6% полиакриламидном геле с последующим окрашиванием бромистым этидием и визуализацией в проходящем ультрафиолетовом свете.
Результаты анализа показали, что распределение частот генотипов и аллелей локуса BamH1 гена MAOA в обеих группах крыс WAG/Rij оказалось схожим, статистически достоверных различий как по генотипам, так и представительству аллелей выявить не удалось.
Библиографическая ссылка
Фасхутдинова Г.Г., Ефимова А.П., Ахмадеев А.В., Калимуллина Л.Б. Исследование полиморфного локуса BamHI гена МАО А у крыс линии WAG/Rij с генотипами А1/А1 и А2/А2 по локусу Taq 1A гена рецептора дофамина второго типа (DRD2) // Современные наукоемкие технологии. – 2012. – № 8. – С. 40-40;URL: https://top-technologies.ru/ru/article/view?id=30852 (дата обращения: 23.11.2024).