Исследование проведено на 74 половозрелой морской свинке-самцах, массой 400-450 гр., из которых 44 была использована в эксперименте, а 30 - служили в качестве контроля. Содержание морских свинок проводилось в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей (Страсбург, 1986). Перед проведением эксперимента морские свинки адаптировались к условиям лаборатории с целью исключения стрессового фактора 3-5 раз подвергались «ложному» воздействию с включенной аппаратурой, но отсутствием самого излучения. Экспериментальные животные подвергались воздействию воздействию микроволн (длина волны -12,6 см, частота 2375 МГц, плотность потока мощности - 60 мВт/см², экспозиция - 10 мин.), а затем через 24 часа - однократного общего рентгеновского излучения (доза-5 Гр, 0,64 Гр/мин., фильтр-0,5 мм Си, напряжение-180 кВ, сила тока-10 мА, фокусное расстояние-40 см). В качестве источника микроволн служил аппарат «ЛУЧ-58», а рентгеновского излучения был использован рентгеновский аппарат «РУМ-17». Облучение производилось в одно и то же время суток - с 10 до 11 часов в осеннее-зимний период, с учетом суточной и сезонной радиочувствительности (Щербова Е.Н., 1984). Выведение животных из эксперимента и забор материала производился сразу, через 6 часов, на 1, 5, 10, 25 и 60-е сутки после окончания воздействия. Кусочки кожи были взяты из различных областей (голова (щека), спина, живот). Для гистологического изучения был использован материал, фиксированный в 12% нейтральном формалине, затем залитый в парафин, из которого изготавливались срезы толщиной 7 мкм, которые окрашивались по традиционной методике - гематоксилином и эозином, по Ван-Гизону в модификации Вейгерта. Также был использован ряд гистохимических методик. На белки срезы кожи окрашивались 0,1% водным и насыщенным сулемовым растворомами бромфенолового синего (БФС). Гликозаминогликаны выявлялись окраской срезов 1% раствором альцианового синего при рН-1,0 и рН-2,5 с постановкой соответствующих контролей и 0,5% раствором толуидинового синего для выявления метахромазии. На гликопротеиды и нейтральные мукополисахариды срезы окрашивались путем постановки ШИК-реакции по MacManus. Контроль на гликопротеиды и нейтральные мукополисахариды производился путем обработки срезов амилазой. Для выявления РНК использовался метод окраски срезов по Браше. Часть объектов, для выявления РНК и ДНК, окрашивалась с помощью хромово-квасцового галлоцианина по Эйнарсону. Для электронной микроскопии участки кожи фиксировали в 2,5% глютаральдегиде на 0,2 М кокадилатном буфере (рН-7,2), постфиксировали в 1% растворе осмиевой кислоты. Все образцы пропитывали и заливали в аралдит. Срезы получали на ультратоме LKB-III (Швеция). Полутонкие срезы окрашивали толуидиновым синим, ультратонкие контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца, просматривали и фотографировали в электронном микроскопе JEM-100 CX II (Япония). Проводился гематологический контроль (подсчет общего количества эритроцитов и лейкоцитов).
Сразу после облучения у морских свинок в сосочковом и сетчатом слоях дермы кожи всех участков локализации часть клеток интенсивнее, чем в контроле, окрашивается эозином и галлоцианином, при окраске по Эйнарсону. В отдельных клетках дермы имеет место вакуолизация цитоплазмы, а в ядрах - гиперхромия ядрышек. Через 6 часов после окончания комбинированного воздействия микроволн и Х-лучей, в части клеток дермы кожи всех участков отмечается снижение интенсивности окраски цитоплазмы эозином, галлоцианином, при окраске по Эйнарсону, а также водным раствором БФС. В отдельных клетках дермы отмечается очаговая вакуолизация цитоплазмы, а в их ядрах преимущественная концентрация глыбок хроматина около кариолеммы. В сетчатом слое дермы наблюдается интенсивная окраска фуксином части коллагеновых волокон. При электронномикроскопическом исследовании на 1-е сутки после окончания комбинированного воздействия микроволн и рентгеновских лучей со стороны части коллагеновых волокон отмечаются явления гипоосмиефильности. Ядра части клеток дермы кожи набухшие, глыбки хроматина в указанных ядрах измельчены и пылевидно распределены по кариоплазме. Цитоплазма значительной части клеток сосочкового и сетчатого слоев кожи проявляет низкое сродство к галлоцианину, при окраске по Эйнарсону, и насыщенному сулемовому раствору БФС. На 5-е сутки после окончания комбинированного действия СВЧ-волн и рентгеновских лучей часть клеток дермы кожи, в том числе фибробластов, отличают явления вакуолизации цитоплазмы и кариопикноза. При окраске по Браше, в указанных клетках отмечается снижение степени пиронинофилии, а также ослабление интенсивности окраски цитоплазмы водным раствором БФС, что свидетельствует о снижении содержания основных белков. На 10-е сутки после окончания комбинированного воздействия микроволн и рентгеновского излучения в сосочковом слое отмечается число тканевых базофилов, особенно в коже головы (щеки) и живота, зернистость которых, при окраске толуидиновым синим, окрашена метахроматично, в местах скопления указанных клеток в соединительной ткани отмечаются очаги метахромазии. Наиболее часто подобные очаги выявляются около кровеносных сосудов, сальных желез и волосяных фолликулов. Несколько усилена окраска указанных участков соединительной ткани и альциановым синим рН-1,0. На 25-е сутки после окончания комбинированного воздействия микроволн и рентгеновских лучей изменения со стороны клеточного и волокнистого компонента сосочкового и сетчатого слоев дермы сходны с описанными в предыдущий срок. На 60-е сутки после комбинированного воздействия сродство большей части клеток дермы кожи, в том числе дифференцированных и зрелых фибробластов, повышено как к эозину, так и пиронину, при окраске по Браше, и галлоцианину, при окраске по Эйнарсону, а также осмию, при электронной микроскопии срезов кожи. Ядра указанных клеток чаще имеют правильную форму, равномерное распределение хроматина и повышенную окраску кариоплазмы гематоксилином, и метиловым зеленым, при окраске по Браше. При электронной микроскопии ядра дифференцированных фибробластов характеризуются наличием гиперосмиефильных глыбок хроматина, локализуются преимущественно около кариолеммы, в центре указанных ядер нередко наблюдаются 2 гиперосмиефильных, неправильной формы, ядрышка; вокруг данных фибробластов отмечаются интенсивно окрашенные коллагеновые волокна, имеющие различную толщину. Ядра эндотелиоцитов сосудов микроциркуляторного русла дермы кожи чаще имеют овальную, уплощенную форму, правильно ориентированы относительно базальной мембраны внутренней оболочки сосуда. Глыбки хроматина в указанных ядрах укрупнены, равномерно распределяются по кариоплазме, несколько возрастает и сродство к гематоксилину, и метиловому зеленому, при окраске по Браше.
Полученные данные свидетельствуют о выраженных морфофункциональных изменениях клеток сосочкового и сетчатого слоев дермы кожи различных участков локализации, при комбинированном воздействии микроволн и рентгеновских лучей на протяжении всего периода наблюдений (60 суток) в эксперименте.
Библиографическая ссылка
Мельчиков А.С., Мельчикова Н.М., Рыжов А.И. МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ КЛЕТОЧНОГО КОМПОНЕНТА ДЕРМЫ КОЖИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ ПРИ КОМБИНИРОВАННОМ ВОЗДЕЙСТВИИ МИКРОВОЛН И РЕНТГЕНОВСКИХ ЛУЧЕЙ // Современные наукоемкие технологии. – 2007. – № 6. – С. 69-71;URL: https://top-technologies.ru/ru/article/view?id=25015 (дата обращения: 03.12.2024).