Цель работы - исследование влияния бактериальной вакцины на цитотоксическую активность (ЦА) мононуклеарных лейкоцитов (МЛ) периферической крови человека в культурах.
МЛ выделяли из стабилизированной гепарином периферической крови 15 здоровых доноров. Кровь, разведённую в 2 раза средой 199, центрифугировали в градиенте плотности фиколл-урографина. МЛ, образовавшие интерфазное кольцо, собирали, отмывали в среде 199 и осаждали центрифугированием. Для дальнейшего использования в эксперименте культивировали клетки-мишени эритробластного лейкоза К-562 и колоректального рака Соlo в среде RPMI-1640. Использовали поликомпонентную вакцину «Иммуновак-ВП-4» из антигенов условно-патогенных микроорганизмов (ГУ НИИВС им. И.И. Мечникова РАМН), содержащую липополисаридный комплекс (ЛПС), ассоциированный с белком наружной мембраны грамотрицательных микроорганизмов, пептидогликан, тейхоевые кислоты и лабильные белковые компоненты стафилококка. Предварительно определяли прямое цитотоксическое действие вакцины на клетки линии К-562 и Соlo в концентрациях от 0,1 до 10,0 мкг/мл и установили отсутствие эффекта. В дальнейшем к МЛ добавляли вакцину в дозах от 0,01 до 10 мкг/мл и инкубировали в течение 72 часов. Для выявления ЦА клеток использовали тест восстановления 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия бромида (МТТ-тест). Цитотоксическую активность МЛ определяли на линии К-562 и Colo. Опухолевые клетки (3´104 в 1 мл) инкубировали в культуральной среде с обработанными вакциной МЛ в соотношениях 1:5; 1:2,5; 1:1 в микропланшетах. Затем в лунки добавляли витальный краситель МТТ и по оптической плотности, измеряемой на мультискане, рассчитывали процент лизиса опухолевых клеток. Максимальная спонтанная киллерная активность МЛ отмечалась при соотношении 1:5. При данном соотношении клеток-мишеней и клеток-эффекторов вакцина во всех дозах оказывала наибольший стимулирующий эффект на ЦА мононуклеаров по отношению к клеткам линии Соlo. Далее была изучена способность вакцины ВП-4 индуцировать НK-активность МЛ по отношению к клеткам линии К-562 с выбранным наиболее оптимальным соотношением клеток-мишеней и клеток-эффекторов - 1:5. Внесение в среду культивирования вакцины в концентрациях 1,0 и 10,0 мкг/мл достоверно повышало уровень цитотоксичности МЛ по отношению к клеткам линии К-562. В эксперименте наблюдался дозозависимый эффект влияния вакцины ВП-4 на цитотоксичность мононуклеарных лейкоцитов.
Можно предположить, что при использовании вакцины «Иммуновак-ВП-4» происходит: во-первых, взаимодействие антигенов препарата с ЛПС-рецепторами моноцитов/макрофагов, содержащихся в популяции МЛ с последующей инициацией секреции регуляторных цитокинов (IL-12, TNF и др.), а во-вторых, активация Т-лимфоцитов и НК-клеток (основных эффекторов противоопухолевого иммунитета) под действием белковых компонентов вакцины.
Сложные механизмы влияния подобных вакцин пока изучены недостаточно, что требует продолжения исследований для обоснования применения их в практике клинической онкологии в качестве иммуномодулирующих препаратов.
Библиографическая ссылка
Ахматова Н.К., Лебединская Е.А., Мелехин С.В., Лебединская О.В., Доненко Ф.В., Шехмаметьев Р.М., Киселевский М.В. ВЛИЯНИЕ БАКТЕРИАЛЬНОГО ИММУНОМОДУЛЯТОРА НА ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ МОНОНУКЛЕАРНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА // Современные наукоемкие технологии. – 2006. – № 6. – С. 65-65;URL: https://top-technologies.ru/ru/article/view?id=22869 (дата обращения: 21.11.2024).