Исследование рака молочной железы (РМЖ) является актуальным, так как, несмотря на многие годы исследований и врачебной практики, до сих пор трудно подобрать оптимальный метод лечения [1]. Тогда как иммунотерапия интерлейкином-2 (ИЛ-2) меланомы и рака почки достаточно широко применяется в клинической практике, этот вид иммунотерапии как метод лечения РМЖ изучен недостаточно. Ранее мы показали, что эффект терапии ИЛ-2 в летальной клинической модели перевитого РМЖ мыши in vivo может как угнетать, так и стимулировать рост опухоли [1, 2]. Целью настоящего исследования было сравнить эффекты однократной инъекции иммуностимуляторов ИЛ-2 и Имунофана (ИМФ) в предстартовой модели (до перевивки опухолевых клеток РМЖ) на последующее проявление и рост опухоли.
Материалы и методы. Опухолевые клетки (ОК) были получены от самки линии A/WhySnJCitMoise (далее, A/Sn) со спонтанным РМЖ и культивированы in vitro в среде RPMI-1640. На день 0 сингенные самцы A/Sn (n=33, возраст 20±1 недель, вес 30.0±0.5 г) с индивидуальными метками были однократно пролечены ИЛ-2 («Novartis», 103МЕ/мышь, n=11), ИМФ (НПП «БИОНОКС», 0.2 мл 1 % раствора/мышь, n=10). Контрольная группа получила инъекцию растворителя (0.2 мл 0.9 % NaCl, n=12) аналогичным образом и в те же сроки. Через 3 дня мышам были подкожно инокулированы ОК (5х105/мышь) под правую переднюю лапу, в район жировой подушечки. Еженедельно в течение 15 недель оценивали динамику проявления (путем пальпирования) и роста опухолей (измерение диаметра). Ежедневно следили за выживанием мышей. Сравнение результатов производилось с помощью непарного двухконцевого t-критерия Стьюдента.
Результаты. Опухоли проявились раньше у мышей, пролеченных ИЛ-2 и ИМФ (у 73 % и 70 % мышей, соответственно, против 50 % в контроле на 8 неделю, динамика представлена в табл. 1).
Таблица 1
Доля мышей с РМЖ по группам
|
Группы |
Процент мышей с РМЖ по неделям |
||||||||||
|
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
12 |
15 |
|
|
Контроль, n=12 |
8 |
25 |
33 |
33 |
42 |
50 |
58 |
67 |
75 |
83 |
83 |
|
ИЛ-2, n=11 |
18 |
36 |
36 |
55 |
73 |
73 |
73 |
73 |
73 |
73 |
73 |
|
ИМФ, n=10 |
30 |
40 |
70 |
70 |
70 |
70 |
70 |
70 |
70 |
70 |
70 |
Была выявлена достоверная стимуляция опухолевого роста под действием иммуномодуляторов по сравнению с контролем (динамика роста опухоли представлена в табл. 2).
Таблица 2
Динамика роста РМЖ
|
Опухоленосители |
Динамика роста опухолей по неделям, мм |
||||||||||
|
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
12 |
15 |
|
|
Контроль, n=10/12 |
0.2 |
0.6 |
1.1 |
2.5 |
4.9 |
4.5 |
6.9 |
8.4 |
10.3 |
11.0 |
15.4 |
|
ИЛ-2, n=8/11 |
1.1 |
2.0 |
2.8 |
4.6 |
8.8 |
10.9 |
13.9 |
13.9 |
17.1 |
16.9 |
* |
|
ИМФ, n=7/10 |
0.5 |
1.1 |
2.3 |
3.4 |
6.7 |
8.9 |
14.1 |
14.7 |
15.4 |
15.8 |
* |
|
t-критерий: контроль – ИЛ-2 |
0.351 |
0.326 |
0.283 |
0.438 |
0.271 |
0.096 |
0.092 |
0.190 |
0.132 |
0.118 |
|
|
t-критерий: контроль – ИМФ |
0.383 |
0.414 |
0.070 |
0.568 |
0.474 |
0.092 |
0.029 |
0.056 |
0.077 |
0.064 |
|
* – в группе осталось менее трех мышей.
Пролеченные ИЛ-2 и ИМФ опухоленосители погибли раньше (75 % и 100 % мышей, соответственно, против 40 % в контроле, на 15 неделю). Однако на конец эксперимента среди пролеченных ИЛ-2 и ИМФ осталось 27 % и 30 % мышей, соответственно, без пальпируемых опухолей, тогда как в контроле – только 17 %. Полученные результаты показали, что как ИЛ-2, так и ИМФ в одинаковой мере ускорили проявление и рост перевитого РМЖ. Таким образом, иммуномодулирующая активность ИМФ в используемой дозе в данной модели соответствовала активности известного иммуномодулятора ИЛ-2 в дозе 103/мышь.
Выводы. Однократное применение ИЛ-2 и ИМФ до перевивки РМЖ ускорило проявление и рост перевитой опухоли у большинства реципиентов и ухудшило картину выживания мышей-опухоленосителей. Но в пролеченных группах доля мышей, у которых рак не проявился, была выше.
Заключение. Используемую предстартовую модель РМЖ можно использовать в качестве сравнительного функционального теста для выявления иммуностимулирующих свойств лекарственных препаратов с предполагаемой иммуномодулирующей активности.