Для изучения пролиферативной активности эпителиальных дифферонов в слизистых оболочках дыхательного тракта, ротовой полости, эпидермиса кожи, мы использовали метод Браше на выявление ДНК в кератиноцитах. Дополнительное подтверждение об особенностях физиологического регенераторного потенциала в эпителиальных дифферонах изученных структур было получено с помощью метода иммуногистохимической метки пролиферирующих клеток на белок гена Ki-67. Наилучшие результаты получены после того, как были определены оптимальные сроки проведения каждого этапа обработки материала. Парафиновые срезы толщиной 5мкм монтировали на стекла, предварительно обработанные в течение 5 мин 0.01% раствором поли-л-лизина (Poly-l-lyzine solution 0.01%, Sigma USA) и высушенные в термостате при 56 С в течение часа. После стандартной процедуры депарафинирования в толуоле и спиртах, срезы для восстановления антигенной структуры, подвергали термической обработке в специальном растворе (Target Retrieval Solution, DAKO, Denmark) на водяной бане при температуре 95-97 градусов по Цельсию в течение 30 минут. Затем стёкла охлаждали до комнатной температуры, промывали в течение 7 минут 3% раствором перекиси водорода для подавления эндогенной пероксидазы, после чего промывали в 3-х сменах 0,02 М фосфатного буфера (рН 7,5) по 6 минут в каждой. После этого наносили первичные антитела к белку Ki-67 (DAKO,Denmark), инкубировали в течение 40 минут во влажной камере в термостате при 37 С, промывали в 3-х сменах 0,02 М фосфатного буфера рН 7,5 по 7 мин в каждой. Наносили стрептавидин, коньюгированный с пероксидазой хрена (Streptavidin Peroxidase Conjugated, DAKO, Denmark). Интенсивность окрашивания контролировали под микроскопом (инкубировали с ДАБом приблизительно в течение 5-6 минут). После появления коричневого окрашивания ядер срезы промывали в дистиллированной воде в течение 5 минут, докрашивали гематоксилином, заключали в бальзам. В результате обработки препаратов выявляются ядра пролиферирующих клеток, находящихся в S-периоде, когда наблюдается максимум синтеза белка гена Ki-67,коррелирующего с концентрацией ДНК. Нами получена чёткая характеристика динамики регенераторных возможностей эпидермиса кожи в области ожога, на границе ожога со здоровой тканью, в неповрежденных участках и в прижившемся аутодермотрансплантате. Также были исследованы физиологические и репаративные возможности регенераторного потенциала кератиноцитов слизистой оболочки полости рта в зоне протезного ложа десны у относительно здоровых и больных сахарным диабетом пациентов стоматологических стационаров.
Установлено, что регенераторный потенциал эпителиоцитов слизистой оболочки дыхательного тракта зависит от возраста и наличия патологии, а также от острого или хронического течения заболеваний.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:
- Борщёва Н.И., Пуликов А.С. Коррелятивные связи между морфологическими структурами слизистой оболочки желудка и показателями иммунного статуса при различных формах хронического гастрита // Морфология.-2006.-№4.-с.27.
- Вылежанина Т.А., Урбанович В.И. Метаболические реакции эпителиоцитов десневых сосочков при патологии периодонта // Морфология.-2006.-№4.-с.35.
- Зиновьев А.С., Кононов А.В. Хронические воспаления слизистых оболочек: интеграция иммунитета и регенерация //Арх. Патол.-1997.-№9.-с.8-24.
- Орехова Л.Ю., Оганян Э.С., М.Я. Левин, Калинин В.И. Характеристика Т- и В-систем иммунитета больных с воспалительными заболеваниями пародонта, страдающих сахарным диабетом // Пародонтология.-1999.-№3(19).-с.24 -26.
- Зинкернагель Р. Иммунная защита- иммунопатология - аутоиммунитет //Аллергология и иммунология.-2006.-т.7.-№3.-с.241-242.
Работа представлена на II научную международную конференцияю «Фундаментальные исследования в биологии и медицине», Черногория (Бечичи), 8-15 июня 2007 г. Поступила в редакцию 12.05.2007.
